细胞免疫荧光
1、细胞自噬是细胞内一种自我保护机制，其原理是通过形成自噬体与溶酶体融合，将细胞内不需要的胞质成分降解并再利用。目前，自噬检测主要有直接法和间接法。直接法通过观察自噬体的形态变化，如通过透射电子显微镜观察自噬性结构的形成，是最直接且经典的方法。
2、在进行细胞免疫荧光染色时，通常会同时使用DAPI染料来标记细胞核，以便于在后续的图像分析中区分细胞核和荧光标记蛋白的位置。 使用电脑软件将DAPI染色的细胞核与荧光标记蛋白的图像进行合并（merge），可以更清晰地观察到荧光蛋白的定位情况。
3、. 配制荧光标记的二抗：Ab50598 Goat anti-rabbit IgG(H&L) TRITC，使用PBS或FBS稀释至1：200。1 加入二抗，室温下避光孵育1小时。1 用冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，然后在摇床上用冰PBS洗一次，5分钟。1 加入DAPI进行细胞核染色，每皿滴加1滴，确保覆盖所有细胞。
4、在细胞免疫荧光实验中，封片是一个关键步骤，它能有效保护荧光标记，延长荧光信号的稳定性和可见度。封片的过程通常包括以下几个步骤：首先，将细胞爬片小心放置于35mm或60mm的细胞培养皿中，用PBS缓冲液清洗三次，以去除残留的细胞培养基或其他杂质。如果细胞爬片较小，操作时需要格外小心，以免损坏。
5、免疫荧光细胞化学是一种检测细胞或组织内特定抗原或抗体的技术。其基本原理是基于抗原抗体反应。首先，将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光标记物。然后，使用这种荧光标记的抗体（或抗原）作为分子探针来检查细胞或组织中的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素。
6、当细胞面临自我修复或压力时，一个神秘的过程——自噬，会在细胞内部悄然展开。自噬体，如同细胞内的小囊泡，通过与胞质成分的聚合和膜的延伸，形成一个双层膜结构，这是自噬现象的关键步骤。直接和间接的检测方法中，LC3细胞免疫荧光法因其灵敏度和特异性而备受青睐。
免疫抑制剂和甲强龙有什么分别
甲强龙属于肾上腺皮质激素及促肾上腺皮质激素药，其化学名为丁二酸钠-6甲强的松龙，商品名包括琥珀甲强龙、甲泼尼龙和甲氢泼尼松琥珀酸钠。这种药物主要用于器官移植排异反应、免疫综合征（尤其是抑制免疫作用），也可用于急性肾上腺皮质功能不全、手术休克等。
泼尼松：是常用的糖皮质激素之一，对肺纤维化有一定的治疗效果，能够减轻炎症反应，延缓纤维化进程。甲强龙：也是糖皮质激素类药物，具有较强的抗炎作用，可用于肺纤维化的治疗，尤其在病情急性加重时。其他免疫抑制剂：环磷酰胺：当糖皮质激素治疗反应不佳或有禁忌时，可考虑加用或改用环磷酰胺。
激素：常用的有强的松、甲强龙等，激素治疗肾病综合征的机理是具有抗炎作用，可以改善肾脏炎症，从而减轻尿蛋白等临床症状。免疫抑制剂：常用的有环磷酰胺、环孢素胶囊等药物，免疫抑制及其作用机理是抑制机体免疫，从而减轻肾脏炎症。所以，目前治疗肾病综合征最有效、最常用的药物是激素和免疫抑制剂。
副作用最小的免疫抑制剂有什么
免疫抑制剂有很多种，副作用最小的免疫抑制剂一般是中成药制剂，例如白芍总苷胶囊或者雷公藤等。白芍总苷胶囊是一种植物制剂，不良反应主要有腹泻、腹痛等，一般不用特殊处理，停药之后会自行消失。
在治疗中不会选择一种免疫抑制剂，很多时候会选择不同机制免疫抑制剂进行联合用药，包括激素、他克莫司或者霉酚酸酯，这些药物的用量减少，不良反应发生率会降低。所以没有副作用最小的免疫抑制剂，只有副作用最小的免疫抑制方案，而这个方案需要医生和药师共同制定。
其中，环孢菌素A（CsA）是瑞士科学家Borel在1970年代后期发现的一种11氨基酸环形多肽，它能特异性抑制淋巴细胞反应，对T细胞，尤其是TH细胞有较强抑制作用，对其他免疫细胞影响较小。经临床验证，CsA在抗排斥反应中表现出优越的疗效且副作用相对较少，1980年代末被批准商业化应用。
免疫抑制剂主要适用于免疫功能过度亢进的疾病，或者器官移植后需要抑制免疫功能减轻排斥反应的情况。目前，临床常用的免疫抑制剂包括有糖皮质激素，例如强的松、甲泼尼龙等。另外，还有环孢菌素、6-巯基嘌呤以及环磷酰胺等，都是临床常用的免疫抑制剂。
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