免疫组化sp法检测的p53是野生型还是突变型
很多肿瘤中发现有抑癌基因P53的突变，P53突变率与肿瘤发生的关系是肿瘤研究的一个方面。免疫组化设计的抗体是针对突变型P53的。但是，要注意：① 免疫组织化学检测阳性并不一定都有基因突变. p53过表达也可用免疫组织化学方法检出。
免疫组化的操作步骤
准备实验器材和试剂 开始免疫组化实验前，确保你有以下器材：不锈钢高压锅、电炉、微慧旅波炉和水浴锅。接着，配制以下试剂：- PBS缓冲液（2-4 pH）：含有NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4的平衡溶液。- 0.01 mol/L柠檬酸钠缓冲液 (pH 0)：由柠檬酸钠和柠檬酸配制而成。
免疫组化操作步骤如下： 切片常规脱蜡至水，如需抗原修复，可在脱蜡后进行。接着，用缓冲液洗涤3分钟，两次。 为了减少内源性过氧化酶的非特异性染色，将切片放入Hydrogen Peroxide Block中，孵育10-15分钟，然后再次用缓冲液洗涤5分钟，两次。
对于细胞爬片，首先需将爬片快速置于冷丙酮中固定20-30分钟。然后，用蒸馏水浸泡两遍，再用打孔液浸泡一次。最后，按照上述石蜡切片的步骤进行后续的正常血清封闭、抗体滴加、显色等步骤。值得注意的是，检测细胞膜抗原时，无需执行第三和第四步的打孔处理。
手把手教你做免疫组织化学IHC实验
1、以下是关于免疫组织化学IHC实验的详细步骤，以SP法为例：首先，进行脱蜡水化处理。切片需在APES溶液中浸泡以防止脱片，随后在二甲苯、无水乙醇和不同浓度的酒精中梯度清洗，以彻底脱去石蜡，避免非特异性染色。保持玻片湿润直到进行下一步。清洗阶段，先用蒸馏水轻柔冲洗，再用PBS清洗。
2、脱蜡水化：先用APES浸泡防止脱片，然后依次用二甲苯、无水乙醇和蒸馏水去除蜡质，注意控制酒精浓度梯度以避免组织损伤。 清洗：用蒸馏水和PBS清洗切片，尽量温和，可轻轻摇晃以确保彻底。 抗原修复：根据实验情况选择合适的修复方法，如枸橼酸缓冲液加热，恢复抗原空间构型。
3、包埋组织：将组织在4%甲醛中固定48小时，随后脱水、浸蜡并包埋。 修片：裁剪蜡片，确保主要组织区域在视野中。 组化：将组织蜡块软化并切片，60°C烘片1小时。步骤继续如下： 脱腊：将切片在60°C烘箱中烘4小时以上，随后在二甲苯中浸泡。
细胞示踪技术
1、Modo 等应用右旋糖酐聚合物连接的Gd-DTPA 与若丹明颗粒(gadolinium rhodamine dextran，GRID )可同时提供MRI 和荧光组织显像，将之标记永生化小鼠神经干细胞MHP36 细胞后移植至脑缺血大鼠的海马后进行7 T MR 离体成像， 证实MRI 能可靠分辨移植细胞以及示踪细胞迁移。
2、遗传谱系示踪技术：周斌团队利用和发展了基于同源重组酶系统的遗传谱系示踪技术，这种技术可以精准地标记和追踪哺乳动物体内的细胞，从而揭示细胞在发育、疾病和再生过程中的行为。这一技术的创新性和实用性使得周斌团队在该领域取得了显著成就。
3、年，Hao Zhu研究组在Science杂志上发表文章，揭示了肝小叶第二区域的肝细胞是肝脏稳态维持和损伤修复中的主要细胞来源。通过CRISPR-Cas9技术构建了11种标记肝小叶不同区域的转基因小鼠，发现稳态条件下，小叶中心区域的肝细胞不断分裂产生新细胞，而第一区域和第三区域的部分细胞逐渐消亡。
4、首先，进行细胞爬片，确保细胞形态与活性。然后，使用PKH67荧光染料对外泌体进行染色，此步骤可有效标记外泌体，便于后续观察和追踪。接着，将标记后的外泌体与目的细胞进行共培养，这一步旨在研究外泌体在特定细胞环境中的行为。
5、在探索外泌体示踪实验的途径时，研载生物科技（上海）有限公司作为一家专业的生物科技公司，提供了一整套全面的解决方案。首先，通过细胞爬片技术，可以精准获取目标细胞，为后续的实验打下坚实基础。接下来，使用PKH67染色方法对外泌体进行标记，该方法具备良好的荧光稳定性，便于后续的追踪与分析。
免疫组化SP法中关于过夜的一些问题
1、免疫组化做片是按照科室的时间设计来制作的，烤片这步没有必要一定按照书上讲的过夜。比如：早上切片先60°烤1个小时，转45°烤2个小时，然后用电风吹开热档一直吹干蜡即可。然后按常规制片到水化就可以了。然后中午热修复，自然冷却，下午出来进抗体。
2、在连接抗体的选择上，错误的连接可能导致假阴性结果。使用SP法或ABC法时，必须根据所选抗体类型正确选择连接抗体。例如，单克隆鼠抗人抗体需配对免抗鼠IgG连接抗体。若使用混合型抗体，则不必过于担心连接问题，但应确保与所选抗体完全兼容。复合物的使用和孵育时间的确定对于免疫组化染色至关重要。
3、以下是关于免疫组织化学IHC实验的详细步骤，以SP法为例：首先，进行脱蜡水化处理。切片需在APES溶液中浸泡以防止脱片，随后在二甲苯、无水乙醇和不同浓度的酒精中梯度清洗，以彻底脱去石蜡，避免非特异性染色。保持玻片湿润直到进行下一步。清洗阶段，先用蒸馏水轻柔冲洗，再用PBS清洗。
4、实验结果分析，常见的IHC染色问题包括所有切片呈阴性或阳性反应，切片背景过深等。针对这些问题，需仔细检查实验操作流程，确保缓冲液、抗体、底物等各环节的正确性和适宜性。
5、免疫组织化学染色SP法1)脱蜡、水化；2)PBS洗2～3次各5分钟；3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室温静置10分钟；4)PBS洗2～3次各5分钟；5)抗原修复；6)PBS洗2～3次各5分钟；7)滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。
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希望本篇文章《免疫组化sp法免疫组化sp法注意事项》能对你有所帮助！
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