什么是silac技术?
SILAC技术是质谱定量蛋白质组学的重要工具定量蛋白质组学，它通过稳定同位素标记氨基酸（如13C、15N）在细胞培养中实现蛋白质的准确相对定量。
SILAC 技术定量蛋白质组学，即细胞培养中稳定同位素标记的氨基酸引入技术，是基于质谱的定量蛋白质组学中简单、稳定且强大的方法。此技术由丹麦 Mann 实验室的 Ong 等人于 2022 年首次应用于定量蛋白质组学，提供准确的相对定量，无需化学衍生或额外操作。广泛应用于细胞生物学、生物化学、药物学等领域。
SILAC是一种用于高通量定量蛋白质组学的有效方案，根据哺乳动物细胞增殖原理设计，用于定量蛋白质组学研究，分析细胞中的蛋白质相互作用和表达差异。
线粒体蛋白内参
请问您是想问tom20可以作为线粒体内参吗这个问题吗？可以。TOM20是一种常用定量蛋白质组学的线粒体内参蛋白，也被称为线粒体通透孔蛋白20。是线粒体外膜上定量蛋白质组学的一种蛋白质，参与线粒体蛋白质的运输和装配。作为线粒体内参蛋白，TOM20的表达不受实验条件的影响，可以用于归一化线粒体蛋白质的表达水平。
内参介绍全细胞或细胞浆内参：如β-actin（43KD）、GAPDH（37KD）、tubulin（55KD）等，如肌动蛋白（包括β-actin和α-actin），在细胞中稳定存在，但需注意β-actin在某些条件下的不稳定性。细胞核内参：如Lamin B1（66KD）、HDAC、PCNA等，如PCNA在增殖细胞中表达。
蛋白分子量：内参应与目的蛋白分子量差异明显，如45kDa目标蛋白应避免与β-actin配对，而选择GAPDH或β-tubulin。表达部位：检测全细胞时，GAPDH、β-actin或α-tubulin是通用选项；亚细胞器蛋白则需对应选择，如线粒体蛋白用VDAC1和COX IV。
rDNA，即核糖体DNA。rDNA 就是可以转录产生rRNA的基因，rDNA的活性改变在核仁周期（也就是细胞分裂过程中核仁的消失与重建）中发挥着重要作用。它不是单独存在的，有时候它可以和别的基因间隔分布，比如可以和tDNA间隔。
Label-free/iTRAQ定量蛋白质组学技术
iTRAQ技术定量蛋白质组学，由美国应用生物系统公司ABI研发，是一种多肽体外标记技术。此技术使用4种或8种同位素标签，标记多肽定量蛋白质组学的氨基基团，进行串联质谱分析，能同时比较4种或8种不同样品中蛋白质定量蛋白质组学的相对含量或绝对含量。iTRAQ技术具有高通量、高覆盖度和高灵敏度的特点，但成本较高。
综上所述，选择定量蛋白组学技术时应综合考虑研究目标、样本特性、实验条件和资源。Label-free技术适用于差异较大的样本，iTRAQ和TMT技术适用于同一物种同一组织类型的样本，而DIA技术则特别适用于大规模样本研究。研究人员应根据具体情况和需求，选择最合适的定量蛋白组学技术，以获得准确、可靠的结果。
iTRAQ Labeling和Label Free在蛋白质组学研究中是两种常用的定量方法。iTRAQ标记（iTRAQ labeling）和非标记定量技术，都致力于实现对蛋白质组学的非靶向、定性定量分析。非标记定量技术不依赖同位素标记，直接通过质谱鉴定和分析蛋白质肽段。
Itraq蛋白质组学定量技术，采用稳定同位素标记多肽，通过串联质谱分析，能同时比较多个样本中的蛋白质相对含量，适用于研究不同病理或发育阶段蛋白质表达差异。ITRAQ与TMT同为等重标签标记技术，原理一致，区别在于化学结构略有不同。ITRAQ为当前主流技术，而TMT相关研究文章较少。
实践证明，Labelfree技术具有很好的定量准确性和可信性，成为蛋白质组学领域内的标准解决方案。与基于SILAC和iTRAQ的定量蛋白组学研究技术相比，Labelfree技术无需对蛋白进行标记，降低了成本，适用于相对简单的蛋白混合物定量分析，如co-IP样品。
定量蛋白质组学技术的核心在于精确测量一个基因组表达的全部蛋白质或复杂混合体系中所有蛋白质的含量。iTRAQ和TMT是两种广泛使用的多肽体外标记定量技术，由AB Sciex和Thermo Fisher公司开发，它们利用稳定同位素标签，通过MS/MS分析，同时对比多达10份样本中蛋白质的相对表达水平。
DIA定量蛋白质组学
1、DIA定量蛋白质组学是一种基于静电场轨道阱Orbitrap的全息式质谱数据采集模式，它在一级质谱检测后，会对特定质荷比范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并快速依次扫描相邻的母离子宽口内的所有碎片离子，进行蛋白的定性和定量。
2、DIA（data-independent acquisition）技术是一种新兴的定量方法，特别适用于大规模样本研究。DIA技术的稳定性好，且不受样本个数限制，这使得它在大规模蛋白质组学研究中具有优势。为了充分利用DIA技术，研究者需要预先建立一个包含所有蛋白质信息的library，以确保准确的蛋白质识别和定量。
3、基于DIA的方法在蛋白质组定量上表现出色，比DDA等传统技术更准确、覆盖度更全面。DIA技术通过全面扫描样本中的离子特征，实现更高的蛋白质组覆盖度和更精确的定量结果，成为蛋白质组学研究中的重要工具。高分辨率的DIA谱图提供了清晰准确的峰形，减少了信号重叠与混叠，进一步提高了定量结果的准确性。
4、每次采集window内所有母离子信息及其碎片（扫描速度足够快），因此具有高覆盖度、高重复性的特点。
5、DDA无偏倚的蛋白质检测无需假设，但批效应大，数据丢失。DIA无偏倚的蛋白质检测无需假设，可检测大量蛋白质，但数据量大，分析速度下降。靶向MS批量效应小，具有更好的量化能力，重复性好，但需要开发靶向分析，实验前需确定要分析的蛋白质，且SIS价格昂贵。
本文来自作者[元蝶]投稿，不代表发展号立场，如若转载，请注明出处：https://fastcode.vip/rcfx/202504-22432.html
评论列表（4条）
我是发展号的签约作者“元蝶”！
希望本篇文章《定量蛋白质组学定量蛋白质组学的原理》能对你有所帮助！
本站[发展号]内容主要涵盖：国足,欧洲杯,世界杯,篮球,欧冠,亚冠,英超,足球,综合体育
本文概览：什么是silac技术? SILAC技术是质谱定量蛋白质组学的重要工具定量蛋白质组学，它通过稳定同位素标记氨基酸（如13C、15N）在细胞培养中实现蛋白质的准确相对定量。SILA...